微生物平板划线操作步骤详解

操作前准备：

1. 将接种环、酒精灯、打火机、无菌平板、酒精棉球、镊子、洁净烧杯放入超净工作台。

2. 打开紫外灯，灭菌30分钟。

3. 取菌种放入超净工作台。

4. 操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，调整合适高度，双手可顺利出入即可，不可过高。

操作步骤：

1. 双手及操作台面消毒

用镊子取酒精棉球擦拭双手，并在超净工作台门口处擦拭出一个与肩同宽的正方形区域，作为操作区域。

将用过的酒精棉球放入烧杯中。

2. 物品摆放

将所需物品有序摆放在操作区域内，确保操作过程中取用方便。

3. 点燃酒精灯

打开酒精灯盖，将盖子扣放在远离操作区的台面上。

点燃酒精灯，酒精灯周围35 cm范围内为无菌区。

4. 灼烧接种环

右手持接种环，将金属丝部分置于酒精灯外焰中灼烧至红透。

倾斜接种环，灼烧金属杆部分，确保金属丝与金属杆连接处充分灼烧。

5. 取菌种

左手持菌种试管的底部，将试管口置于火焰的无菌区。

用右手小指打开试管塞，将接种环的金属丝再次灼烧至红透。

将接种环伸入试管内，稍作冷却后，轻轻取一环菌种，注意不要划破培养基。

取出接种环时，避免触碰试管壁。

将试管塞在火焰外焰处灼烧一圈后塞回试管，注意避免烫伤。

6. 平板划线

左手取一个无菌平板，用拇指和食指控制皿盖，其余手指控制皿底。

打开皿盖，使开口角度小于30°。

将接种环上的菌种按划线法接种：

一区法：连续划线，线的边缘应划至培养皿内缘，线要紧密但不相连。

三区或四区法：每划完一区后，灼烧接种环，后一区与前区首尾相连但不重叠。

7. 培养

将划线完毕的平板倒置放入恒温培养箱中培养。

8. 整理台面

操作结束后，将实验物品放回原处。

清理实验产生的垃圾，带出超净台并丢弃至垃圾桶。

9. 结果观察

72小时后观察平板：

应无杂菌污染，若菌落不在划线上则为杂菌。

划线应平直且接近平板边缘，线间紧密但不重叠。

应有较多单菌落，至少10个以上为合格。

注意事项：

操作过程中始终保持无菌意识，避免污染。

灼烧接种环和试管塞时注意安全，避免烫伤。

划线时动作轻柔，确保菌种均匀分布。

培养过程中保持平板倒置，防止冷凝水滴落影响菌落生长。

接种环刚灼烧灭菌后，温度较高，需冷却后再接触菌种和划线，避免菌种大量死亡、培养基融化。

通过以上步骤，可有效完成微生物平板划线操作，确保实验结果的准确性和可靠性。