生物实验倒平板操作技巧全解析

一、培养基温度控制

1. 标准要求：

根据GB 4789.28-2024，熔化后的培养基应放入47℃~50℃的恒温装置中冷却保温，直至使用。培养基达到这一温度的时间取决于其种类和体积。

2. 温度判断技巧：

固体培养基的倾注温度应控制在45℃~50℃。判断方法：用手心轻触盛有培养基的三角瓶，感觉不烫，再用手背触碰，感觉微烫，此时温度约为50℃。（口诀：手心不烫手背微烫）。

3. 温度控制的重要性：

温度过高：培养基凝固时间延长，培养皿盖上会出现大量冷凝水，影响后续实验。对于需要添加不耐热抗生素等试剂的培养基，温度过高会导致试剂失效。

温度过低：培养基可能过早凝固，影响均匀铺板。

二、防止培养皿中产生冷凝水

1. 控制温度：

待培养基温度降至45℃~50℃时再倒平板，此时水蒸气蒸发速度减慢，培养皿盖上产生的水珠减少。

2. 处理冷凝水：

倒平板时，打开皿盖，待全部倒完后，在超净台中静置5分钟，再关闭皿盖，倒置放置备用。（此方法不够严谨，但可减少冷凝水。）

另一种方法是将培养皿叠放，静置至全部凝固后倒置备用。这种方法下，除了最上层的皿盖，其余培养皿盖上不会产生水蒸气。（专家不建议此操作，因可能影响均匀性。）

三、预防培养基气泡形成

1. 灭菌前准备：

琼脂粉在灭菌前应充分溶解，避免未溶解的颗粒导致气泡。

2. 灭菌后处理：

灭菌后，待培养基温度降至50℃~60℃时，轻轻沿壁摇匀，使培养基整体沿同一方向旋转，直至均匀。

对于需要添加抗生素等试剂的培养基，待温度降至45℃~50℃时再加入试剂，轻轻摇匀。

3. 气泡处理：

若培养基中已产生气泡且难以消除，可短暂加热（如微波炉低火5秒），温度升高后气泡会自然逸出。

四、倒平板保持均一性

倾注平板时，应轻轻左右各晃动三圈，确保培养基均匀分布。注意不要让皿盖沾上培养基，晃动时动作要轻柔。

五、根据实际情况调整操作

1. 琼脂质量差异：

不同品牌的琼脂凝固速度不同，即使按照国标配方（琼脂含量1.5%），有些琼脂凝固较快，有些较慢。环境温度较低时，琼脂凝固速度也会加快。因此，需根据实际情况调整琼脂用量。在室温较低时，可适当减少琼脂用量，并在倒平板和混匀时加快动作。

2. 环境温度控制：

若室温过低，可将培养皿放入烘箱中适当加热（约40℃），以延缓培养基凝固。

六、培养基厚度控制

1. 标准要求：

根据GB 4789.282024，倾注熔化的培养基至平皿中（直径90 mm的平皿通常加入15 mL~20 mL琼脂培养基），使培养基厚度至少为3 mm。若平板需贮存、培养时间超过48小时或培养温度高于40℃，则需倾注更多培养基。厚度不足可能导致培养基干燥，影响生长。

2. 厚度控制技巧：

以直径90 mm的培养皿为例，铺满底部后追加少量培养基（约5 mL），总量即可达20 mL，再多倒一点则为25 mL。这需要经验积累，多次操作后可掌握合适的量。

倒平板操作虽看似简单，但细节决定成败。通过控制培养基温度、防止冷凝水、避免气泡形成、保持均一性以及根据实际情况灵活调整，初学者可以逐步掌握这一关键实验技能，提升实验成功率。