液相色谱仪使用指南

液相色谱仪虽然易于上手，但即使是经验丰富的分析员也可能因一些错误操作导致仪器损坏。为了延长仪器寿命并确保分析结果的准确性，以下操作和注意事项不可忽视。

1. 流动相的处理

流动相过滤：流动相中的尘埃或杂质会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此必须预先过滤。建议使用0.2 μm或0.45 μm的滤膜（如Millipore滤膜）进行过滤，并在泵入口连接砂滤棒（或片）。砂滤棒需定期清洗或更换。滤膜分为水系滤膜和有机溶剂滤膜，注意根据流动相的性质作正确选择。

流动相腐蚀性：避免使用含腐蚀性物质的流动相。长时间停泵时，可能析出盐晶体，损坏密封环和柱塞。使用后应立即用纯水清洗泵，再更换适合色谱柱保存的溶剂（如甲醇或甲醇水）。

2. 防止流动相走空

避免空泵运转：流动相耗尽会导致空泵运转，磨损柱塞、缸体或密封环，最终引发漏液。需定期检查溶剂瓶，确保流动相充足。

3. 压力与流量异常的处理

无流动相流出或无压力指示：可能是泵内有大量气体，可打开泄压阀，以较大流量（如5 mL/min）排出气泡，或用50 mL针筒在泵出口抽气。若问题仍未解决，可能是密封环磨损，需更换。

压力或流量不稳：可能由气泡或单向阀内异物引起。可卸下单向阀，用丙酮超声清洗。若砂滤棒内有气泡或堵塞，可用流动相超声清洗，或用稀酸（如4 mol/L硝酸）溶解盐晶体或微生物。

4. 压力过高或过低

压力过高：可能是管路堵塞，需逐段检查并清洗。

压力过低：可能是管路泄漏，需逐段排查。

5. 梯度洗脱的注意事项

溶剂选择：梯度洗脱时，需确保溶剂互溶性。不互溶的溶剂不能用于梯度洗脱，某些溶剂在特定比例下可能不互溶，需特别注意。有机溶剂与缓冲液混合时，可能析出盐晶体，尤其是磷酸盐缓冲液。

空白梯度洗脱：样品分析前需进行空白梯度洗脱，以识别溶剂杂质峰。梯度洗脱所用溶剂需彻底脱气，防止混合时产生气泡。

粘度变化：混合溶剂的粘度随组成变化，可能导致压力波动。例如，甲醇与水以相近比例混合时，粘度显著增加，柱压可能翻倍。需确保梯度洗脱过程中压力不超过仪器或色谱柱的承受范围。

6. 六通阀的使用与维护

样品过滤：进样前需用0.45μm滤膜过滤样品，减少微粒对进样阀的磨损。

阀芯操作：转动阀芯时不可过慢或停留在中间位置，以免流动相受阻导致压力剧增，损坏柱头。

清洗进样阀：每次分析结束后，需用水或能溶解样品的溶剂冲洗进样阀，防止缓冲盐或样品残留。

7. 色谱柱的使用与维护

流速调节：调节流速时应缓慢进行，避免柱压突变。进样阀转动也不可过缓。

反冲色谱柱：除非生产商明确说明，否则不可反冲色谱柱，以免降低柱效。

预柱与保护柱：可在进样器前连接预柱，使流动相在进入分析柱前被“饱和”。复杂样品需预处理或使用保护柱，保护柱应定期更换。

8. 液相色谱仪的四大关键因素

仪器本身：新仪器需由卖家进行系统确认（安装确认IQ、运行确认PQ、性能确认OQ），并由国家或省级仪器检定局校验。建议每半年进行一次内部校验，确保仪器正常运行。

色谱条件：包括流动相、色谱柱、检测波长、流速和进样量。流动相需使用超纯水和色谱级试剂，色谱柱需按说明书清洗，检测波长需根据品种选择，流速和进样量需严格遵循方法要求。

操作人员：操作人员需熟悉仪器操作、日常维护和基础故障排除。样品溶液配制最好由同一人完成，以减少偶然误差。

安装环境：仪器应安装在水平、无振动、无电磁干扰的台面上，数据处理系统应与仪器分隔，以减少基线噪音和对人体的危害。

液相色谱仪的使用需要严格遵守操作规程，避免因疏忽或简化步骤导致仪器损坏。通过规范操作、定期维护和注意细节，可显著延长仪器寿命并确保分析结果的准确性。

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