为什么自己做凯氏定氮法测定样品粗蛋白含量总做不好？

凯氏定氮法作为食品中粗蛋白含量检测的国标方法，具有稳定性好、适用性广、准确度高、方法成熟等特点。但是当我们自己操作检测时，结果往往会出现不稳定、比预期低等问题。其实关注好以下几点，你做凯氏定氮的准确性、稳定性都会大大提高。

1. 样品准备

样品的粉碎和均质性，确保样品粉碎且混合均匀，以获得均质性好的样品，有助于更好的消化和减少测量误差。

样品用量，根据样品的含氮量调整样品用量，低蛋白样品可能需要增加样品用量以减少读数和测定误差。

2. 消化过程

消化催化剂的使用，适当增加硫酸钾的用量可以提高消化温度，但用量不宜过大，以免造成氨损失。

硫酸用量要过量，当样品中脂肪、糖分含量高时，还需增加硫酸用量。

样品需被硫酸完全浸没，确保消化到位。

用定氮管消化时，上部放一个漏斗，使硫酸及时回流，减少硫酸损失，确保消化到位。

3. 蒸馏过程

蒸馏速度和气流，蒸馏速度应控制在每分钟蒸馏出液体5～7mL之间，以保证氨气被完全蒸馏出来。

冷凝管中冷凝水的温度要低于25℃，夏天自来水管的温度有时超过40℃，对氨气的冷凝和收集不利。

硼酸注意不要被污染，加入指示剂后应为红色，吸收氨气后立马转变为蓝绿色，温度不要超过40℃。添加量需保证过量。

4. 滴定和计算

滴定速度控制得当，确保不要滴定过终点。当蓝绿色转红色时，中间存在一个红灰色的颜色状态，此时已是终点，半滴就已过量。

滴定用酸浓度，一般用0.1 mol/L盐酸进行滴定，当样品中蛋白含量较少时，可更换为0.02 mol/L的硫酸进行滴定。

5. 其它

要做空白，如果试剂、方法流程等存在问题，可通过空白管的滴定结果进行判断。

要做质控，比如用已知含量的干燥硫酸铵作为标品，检测后计算回收率，评价检测体系的稳定性、准确性。

滴定用酸的标定要严格进行，标定时所用碳酸钠需提前干燥。

确保试剂未被污染。

指示剂现用现配。